Анимационный фильм «Братья Супер Марио в кино» переносит зрителей в красочную вселенную, созданную по мотивам легендарной игровой серии. История начинается с двух итальянских братьев-водопроводчиков из Бруклина, Марио и Луиджи, которые, пытаясь выполнить обычный ремонт, неожиданно обнаруживают таинственный портал.
После триумфального успеха местного конкурса талантов Бистер, неунывающая коала-продюсер, мечтает о большем. Его верная помощница, храбрая и немного старомодная assisting-олениха Мэри, и разношёрстная труппа — от робкого трио гигантских слонят до колючей панк-красотки Аш и многодетной мамы-поросёнка — готовы к новому вызову.